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方案概述

前言：

糖的含量對食品的品質有極為重要的影響，因此準確測定糖的具體組成及含量對食品加工特性及研究食品的風味特性有極為重要的作用。對于油料種籽，糖類物質是風味物質的主要前體物，油料種籽中糖類物質的種類和含量會影響油料制品的品質。因此油料種籽中的糖類檢測對油脂品質和安全性具有重要意義。

近日，油料種籽標椎GB30390-202X《油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖含量的測定》即將更新。由于GB/T30390-2013《油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的測定高效液相色譜法》標齡長，且沒有涉及現在比較火熱的水蘇糖和棉子糖。方法上只有液相色譜法，也沒有提及離子色譜技術。因此，有關部門對該標準進行了修訂。

本文采用離子色譜法對油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖含量測定。筆者采用皖儀科技離子色譜儀配置安培檢測器，手配NaOH和水為淋洗液。該方法前處理簡單，回收率好，靈敏度高，適用于標椎《油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖含量的測定》。

關鍵詞：油料種籽、離子色譜、糖

1.儀器設備及試劑

1.1離子色譜配置清單

表1儀器配置清單表

序號	名稱	數量
1	IC6300智能型離子色譜儀	1臺
2	AS3100自動進樣器	1臺
3	SmartLabCDS2.0色譜使用工作站	1套
4	PA20 6.5μm3.0x250mm	1個

1.2試劑及標準品清單

表2試劑及標品清單表

序列	試劑及標準品	純度
1	50%氫氧化鈉溶液	分析級（離子色譜專用）
2	冰乙酸	色譜級
3	石油醚	分析級
4	乙酸鋅	分析級
5	亞鐵氰化鉀	分析級
6	葡萄糖	99%
7	果糖	99%
8	蔗糖	99%
9	水蘇糖	99%
10	棉子糖	99%

1.3實驗材料及輔助設備

抽濾裝置；

超聲波清洗機；

萬分之一天平；

一次性注射器（2mL）；

水系針式過濾器（0.22μm）；

超純水，電導率為18.2MΩ·cm（25℃）。

2.實驗方法

2.1溶液配置

2.1.1乙酸鋅溶液（1mol/L）：稱取21.9g乙酸鋅，加3mL冰乙酸，加水溶解稀釋至100mL。

2.1.2亞鐵氰化鉀溶液（1mol/L）：稱取10.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解稀釋至100mL。

2.1.3氫氧化鈉溶液（200mmol/L）：量取10.5mL的50%氫氧化鈉溶液，用預先脫氣的水稀釋并定容至1000mL，氮氣保護。

2.2樣本前處理

2.2.1樣本提取

稱取試樣5g（精確至0.1mg），置于50mL具塞離心管中，加入25mL石油醚，漩渦振蕩1min，2000r/min離心5min，棄去上層石油醚。重復上述步驟2次。60℃水浴蒸發殘留的石油醚，用玻璃棒將樣品轉移至150mL恒重的錐形瓶中，用50mL水分兩次沖洗離心管，洗液并入錐形瓶，緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液各5mL，再加水至溶液總質量約為100g（精確至1mg），室溫攪拌30min后，用定性快速濾紙過濾，濾液再用0.22μm針式過濾器過濾，得到待測樣品，同時做空白試驗。

2.3實驗條件

2.3.1色譜條件

色譜柱：PA20，3.0×250mm

流動相：A相：200mM NaOH；B相：純水C相：20mM NaOH

流速：0.4mL/min

運行時間：65min

柱溫：30℃

檢測區溫：30℃

檢測器：金電極，糖類，四電位

進樣體積：10µL

表3梯度淋洗

時間(min)	類型	A相：200mM NaOH	B相：水	C相：20mM NaOH
0	線性	0	50	50
20	線性	0	50	50
20.1	線性	100	0	0
30	線性	100	0	0
30.1	線性	0	50	50
65	線性	0	50	50

3實驗結果

3.1標準品譜圖

20分鐘內完成5種糖類的測定，各峰均有良好的峰形，無峰形拖尾現象，各化合物響應良好，符合實驗測定需求。

圖1 5種糖色譜圖（0.5mg/L）

表1系統適應性結果

離子	保留時間	分離度
葡萄糖	8.625	1.511
蔗糖	9.692	2.144
果糖	11.125	2.571
水蘇糖	13.275	4.259
棉子糖	18.075	n.a.

3.2線性范圍

取適量混合標準溶液，逐級稀釋到系列濃度制作標準曲線，線性范圍0.05~20mg/L，線性檢測結果與已知濃度的偏差小于最大允許偏差，R²范圍在0.99985~1.00000之間，各組分線性關系良好。

表2 各化合物線性范圍表

化合物	線性范圍	線性相關系數R²
葡萄糖	0.05-20mg/L	1.00000
蔗糖	0.05-20mg/L	0.99985
果糖	0.05-20mg/L	0.99999
水蘇糖	0.05-20mg/L	0.99999
棉子糖	0.05-20mg/L	0.99998

圖2 5種糖線性結果

3.3精密度

按2.2.1提取大豆樣品溶液，在2.3.1儀器條件下連續進樣6針測定。結果如下表所示，大豆樣品中五種糖相對標準偏差均在1%以內。樣品檢測可靠，方法精密度良好。

表3 大豆樣品精密度結果

序號	葡萄糖		蔗糖		果糖		水蘇糖		棉子糖
序號	保留時間	峰面積	保留時間	峰面積	保留時間	峰面積	保留時間	峰面積	保留時間	峰面積
1	8.508	674.064	9.425	9732.960	11.000	427.438	未檢出	未檢出	17.450	848.055
2	8.525	672.865	9.45	9661.781	11.017	424.604	未檢出	未檢出	17.492	845.621
3	8.533	669.040	9.467	9686.701	11.033	422.191	未檢出	未檢出	17.500	846.648
4	8.567	661.757	9.517	9647.158	11.058	426.463	未檢出	未檢出	17.567	842.108
5	8.558	657.606	9.500	9611.206	11.042	422.181	未檢出	未檢出	17.500	837.924
6	8.600	666.787	9.600	9494.508	11.100	421.93	未檢出	未檢出	17.842	843.925
平均	8.548	667.020	9.493	9639.052	11.042	425.801	未檢出	未檢出	17.558	845.047
RSD/%	0.389	0.958	0.653	0.847	0.316	0.568	未檢出	未檢出	0.819	0.432

圖3 大豆中四種糖精密度重疊色譜圖

3.4樣品檢測結果

3.4.1水分檢測

取待測大豆和芝麻樣品，按GB/T14489.1測定樣品中水分含量。結果如下表所示。

表4 樣品水分結果

樣品名稱	m₀/g	m₁/g	m₂/g	w/%
大豆-1	52.0858	57.8970	57.2161	11.72
大豆-2	50.8589	56.6956	56.0093	11.76
芝麻-1	52.3609	57.3794	57.1181	5.21
芝麻-2	49.3781	54.4998	54.2264	5.34

3.4.2樣品檢測

取待測大豆和芝麻樣品，按2.2.1提取樣品溶液，在2.3.1儀器條件下進樣測定。樣品檢測結果如下表所示，大豆和芝麻樣品檢測可靠，結果良好。

表5樣品檢測結果

樣品名稱	離子	上機濃度(mg/L)	水分/%	樣品中糖的含量w/(mg/g)
大豆-1	葡萄糖	1.0120	11.72	2285.54
	蔗糖	12.688	11.72	57310.06
	果糖	1.195	11.72	2698.83
	水蘇糖	/	/	/
	棉子糖	2.493	11.72	5630.28
大豆-2	葡萄糖	0.712	11.76	1611.30
	蔗糖	11.313	11.76	51203.92
	果糖	0.776	11.76	1756.13
	水蘇糖	/	/	/
	棉子糖	2.308	11.76	5223.13
芝麻-1	葡萄糖	8.398	5.21	1768.94
	蔗糖	14.828	5.21	3123.35
	果糖	5.690	5.21	1198.53
	水蘇糖	2.188	5.21	4608.77
	棉子糖	1.975	5.21	416.01
芝麻-2	葡萄糖	6.434	5.34	1359.42
	蔗糖	13.880	5.34	2932.66
	果糖	4.226	5.34	892.90
	水蘇糖	2.234	5.34	4720.15
	棉子糖	2.092	5.34	442.01

圖4大豆-1樣品稀釋200倍測試譜圖

圖5芝麻-1樣品稀釋100倍測試譜圖

4結論

本方法采用皖儀科技離子色譜IC6300系列配置安培檢測器，建立離子色譜法測定油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖。樣品通過前處理，然后經離子色譜柱分離，采用外標法定量，對油料種籽中果糖、葡萄糖、蔗糖、水蘇糖和棉子糖進行定性、定量分析。由數據可得該方法的各色譜峰峰形良好、無拖尾，靈敏度符合國標要求，線性相關系數均大于0.999。說明了該方法配備皖儀科技離子色譜系統滿足對待測樣本的常規性定性定量檢測需求。

下載解決方案